Microscopie électronique
Préparation d’échantillons en cryo-EM; l’eau vitreuse; collecte de données; caméras à détection directe d’électrons et «movie processing» - Olivier Lambert (CBMN, Bordeaux)
Traitement d’images (1): correction de la fonction de transfert du contraste (CTF), sélection des particules, centrage, normalisation, méthodes de classification 2D, attribution angulaire, reconstruction 3D initiale - Ottilie Loeffelholz von Colberg (CBI/IGBMC, Strasbourg-Illkirch)
Traitement d’images (2): concept de rétroprojection et reconstruction 3D; obtention d’une carte cryo-EM; théorème de la section centrale en espace Fourier;type de filtres (bande passante etc.); groupes ponctuels de symétrie (symétries internes) - Leandro Estrozi (IBS, Grenoble)
Tris de structures par classification 3D, classifications et affinements focalisés; filtre de la carte cryo-EM et interprétation de la carte, affinement du modèle atomique - Bruno Klaholz (CBI/IGBMC, Strasbourg-Illkirch)
Aspects pratiques - Cryo-microscopie Electronique - Ottilie Loeffelholz von Colberg, Leandro Estrozi, Olivier Lambert, Bruno Klaholz
Développements de la cryo-EM vers la biologie structurale cellulaire - Amélie Leforestier (LPS, Paris)
La cryo-microscopie n’est pas uniquement réservée à l’étude des macromolécules isolées en solution. Elle permet également de faire de la biologie structure in situ et d’explorer la conformation des macromolécules directement au sein de leur environnement cellulaire. La cryoME cellulaire doit faire face à des problèmes spécifiques : la vitrification d’objets massifs que sont les cellules et tissus (hélium liquide, haute pression); l’obtention à partir de ces objets, de spécimens minces transparents aux électrons par cryo-sections ou amincissement ionique; l’utilisation de la cryo-tomographie pour accéder aux structures 3D; l’identification des espèces moléculaires au sein d’un milieu dense et hétérogène par corrélation cryoME/cryo-microscopie de fluorescence.
More information on cryo-EM
Resolution estimation, map interpretation; Structural analysis; Basic concepts - Bruno Klaholz
La CTF démystifiée - Leandro Estrozi